ANTIFONGIGRAMME

En cas de mycose profonde,l'appréciation de la sensibilité du mycète isolé aux antifongiques est nécessaire car il existe une résistance primaire vis-à-vis de le 5-Fluorocytosine de nombreuses souches de levures, et une résistance secondaire peut se développer en cours du traitement

Méthode des Disques

Milieux utilisés

• Milieu auxanogramme du carbone + 1% de glucose
• Milieu Yeast morphology agar :5FC
• Milieu semi-synthétiques : 5FC
• Milieu casitone : polyènes et dérivés imadazoles (inhibe la 5FC

Candida

• Couler 15 ml de milieu dans une boîte de Pétri. Laisser solidifier.
• Sécher 15 minutes à 37°
• Mettre en suspension dans 10 ml d'eau distillée stérile une öse d'une culture de levures de 24 à 48 heures. Diluer à nouveau pour avoir 10⁵ levures/ml.
• Inonder la surface de la gélose solidifiée avec 5 ml de la suspension, retirer l'excès de liquide à la pipette. Sécher la boîte 15 minutes à 37°
• Déposer les disques d'antifongiques
• Laisser diffuser 30 minutes à la température du laboratoire avant de placer la boîte à l'étuve à 37°
• Incuber 24 heures
• Lire les diamètres d'inhibition

Cryptococcus

• Faire une seule dilution d'une öse dans 10 ml d'eau distillée (suspension de 10⁶ levures/ml)
• Lecture au bout de 48 heures.

Champignons sporulés

• Faire une seule dilution à partir d'une culture sporulée d'environ 5 jours (1 öse pour 10 ml);
• Lecture au bout de 24 heures

Détermination de La Concentration Minimale Inhibitrice

Technique des dilutions en Boîte de Pétri

• Préparer la solution mère de l'antifongique à 1000 microgrammes/ml

(10 mg de produit + 5 ml de solvant + 5 ml d'eau distillée)

• Effectuer stérilement des dilutions de 2 en 2 dans l'eau distillée
• 1000 - 500- 250 - 125 - 62,5 - 31,2 - 15,6 - 7,8 - 3,9 - ,1,8 - 0,9 - 0,4 microgramme/ml
• Mettre dans une boîte de pétri 1,5 ml de dilution de l'antifongique puis couler 13,5 ml de milieu et homogénéiser
• Sécher les boîtes à 3 7°

Antifongique	Solvant	Milieu
AmphotéricineB	Dimethylsulfoxyde DMSO	Sabouraud Casitone semi-synthétique
Mystatine	DMSO	Casitone semi synthétique
Griseofulvine	Acétone	Griseofulvum Sabouraud
5 Fluoro Cytosine	Eau distillée à 50°	Semi-synthétique Yeast morphology agar
Imidazoles	DMSO	Casitone semi-Synthétique

Ensemencer par strie

à partir d'une suspension dans l'eau distillée : 1 öse/ml d'une culture de 24-48 heures) pour les levures et les champignons sporulés

En piqûre centrale

pour les champignons filamenteux

• Incuber 24 heures à 30° ou 37° : levures
• Incuber 7 à 15 jours à 30 ou 25 ° pour les champignons filamenteux.
• Lecture par observation de la croissance ou de l'absence des colonies

Galeries prêtes à l'emploi

exemple de la galerie Fungitest